本书包括六方面的内容：糖类、脂类、蛋白质、核酸、酶的实验技术以及环境专业常用的分子生物技术。全书以68个实验，结合环境工程相关专业特点，在介绍常用环境微生物实验原理和基本操作的基础上，通过相关综合设计实验，提高读者的实际操作和设计实验能力。同时，书中各实验后放置了部分实验器材、试剂、材料图例，增加了可读性和实用性，有助于读者对相关内容的理解、掌握。

微生物学实验技术是环境工程、环境科学、环境监测等专业本科生的专业基础实验课。掌握必要的环境工程微生物学实验技术，对于认识和理解环境工程微生物学的相关理论和专业知识，以及从事相关专业的研究、实践工作具有重要意义。

市政与环境工程生物技术，是环境科学中的一个重要分支，以微生物学科的理论与技术为导向，以环境微生物实验原理和基本操作为基础，研究分子生物学技术在环境保护领域的应用。微生物学实验技术是环境工程、环境科学、环境监测等专业本科生的专业基础实验课。掌握必要的环境工程微生物学实验技术，对于认识和理解环境工程微生物学的相关理论和专业知识，以及从事相关专业的研究、实践工作具有重要意义。目前微生物技术在环境领域的地位日益突出，因此编者在环境工程微生物本科实验教学及总结前人的经验基础上完成了本教材的编写。全书共分为六章，按不同类别，系统地介绍了每一类相关的实验技术。其中第一章介绍糖类的相关实验，包括8个实验；第二章介绍脂类的相关实验，包括5个实验；第三章介绍蛋白质的相关实验，包括20个实验；第四章介绍核酸相关的实验技术，包括9个实验；第五章介绍酶相关的实验技术，包括14个实验；第六章介绍环境专业常用的分子生物技术，包括12个实验。每个实验都按实验目的、实验原理、仪器与试剂、方法步骤编写，并附有思考题。由于编者水平有限，加上时间仓促，书中难免有疏漏和不妥之处，敬请读者批评指正。编 者2022年6月于青岛理工大学

徐爱玲，女，1982年3月生，博士研究生学历，副教授，青岛理工大学环境与市政工程学院环境科学系主任。主要从事环境工程相关本科生、研究生的教学与研究。主持和参加省部级以上项目10余项，发表文章30余篇，授权发明专利6项，省部级以上奖励3项。

前言

第一章　糖类的制备与测定 1
实验一　糖类的性质实验（一）：糖类的颜色反应 2
实验二　糖类的性质实验（二）：糖类的还原作用及多糖的试验 4
实验三　杜氏（Tollen）实验鉴定戊糖 5
实验四　总糖的测定：蒽酮比色法 6
实验五　总糖和还原糖含量的测定 8
实验六　可溶性糖的提取和薄层层析分离 10
实验七　糖的旋光性和变旋现象 13
实验八　甲壳素和壳聚糖的制备及测定 15
第二章　脂类测定技术 18
实验九　粗脂肪含量的测定（索氏抽提法） 19
实验十　碘价的测定（Hanes法） 21
实验十一　皂化价的测定 23
实验十二　油脂酸价的测定 24
实验十三　脂肪酸价的测定 26
第三章　蛋白质分析、测定技术 28
实验十四　蛋白质的性质实验（一）：蛋白质等电点的测定 29
实验十五　蛋白质的性质实验（二）：蛋白质的沉淀及变性 31
实验十六　蛋白质的透析 34
实验十七　蛋白质定量分析（一）：紫外分光光度法 35
实验十八　蛋白质定量分析（二）：酚试剂法 37
实验十九　蛋白质定量分析（三）：双缩脲法 39
实验二十　蛋白质定量分析（四）：考马斯亮蓝G-250染色法 41
实验二十一　蛋白质定量分析（五）：微量凯氏定氮法 43
实验二十二　蛋白质定量测定（六）BCA法 47
实验二十三　乳中酪蛋白的分离 49
实验二十四　SDS-PAGE测定蛋白质相对分子量 51
实验二十五　凝胶层析法分离纯化蛋白质 54
实验二十六　甲醛滴定法测定氨基酸 56
实验二十七　DNS-氨基酸的制备和鉴定 58
实验二十八　用DNS法鉴定蛋白质或多肽的N-端氨基酸 60
实验二十九　氨基酸纸层析法 63
实验三十　氨基酸的薄层层析分离和鉴定 66
实验三十一　氨基酸定量测定茚三酮显色法 69
实验三十二　离手交换柱层析法分离氨基酸 71
实验三十三　SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子量 74
第四章　核酸相关测定、提取技术 77
实验三十四　核酸的定量测定（一）：定磷法 78
实验三十五　核酸的定量测定（二）：紫外吸收法 80
实验三十六　酵母RNA的提取 82
实验三十七　RNA的定量测定：苔黑酚法 84
实验三十八　动物肝脏中DNA的提取 86
实验三十九　植物DNA的提取与测定 88
实验四十　腺苷三磷酸的定量测定：纸电泳法 91
实验四十一　质粒DNA的提取 92
实验四十二　DNA琼脂糖凝胶电泳 94
第五章　酶的实验及相关技术 97
实验四十三　过氧化氢酶和过氧化物酶的作用 98
实验四十四　乳酸脱氢酶及其辅酶Ⅰ的作用 100
实验四十五　温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活力的影响 101
实验四十六　酵母醇脱氢酶的提纯 104
实验四十七　过氧化氢酶米氏常数的测定 107
实验四十八　用正交法测定几种因素对酶活力的影响 110
实验四十九　溶菌酶的提纯结晶和活力测定 114
实验五十　淀粉酶的分离与纯化 116
实验五十一　碱性磷酸酶的提取和分离及比活力测定 118
实验五十二　聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离乳酸脱氢酶同工酶 121
实验五十三　植物过氧化酶活性的测定 125
实验五十四　超氧化物歧化酶SOD的分离纯化技术 126
实验五十五　超氧化物歧化酶活性测定 128
实验五十六　生化需氧量（BOD5）的测定 130
第六章　环境专业常用分子生物技术 134
实验五十七　凝胶的制备及电泳技术 135
实验五十八　普通PCR及产物纯化 137
实验五十九　实时荧光定量PCR技术 139
实验六十　RNA的逆转录及其PCR技术 140
实验六十一　质粒的限制性内切酶消化及其与目标基因的体外重
?组质粒DNA酶切（质粒限制性内切酶消化酶切） 146
实验六十二　大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 149
实验六十三　重组DNA的蓝白斑筛选 152
实验六十四　外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 154
实验六十五　cDNA文库的构建 158
实验六十六　Southern杂交 164
实验六十七　Northern杂交 169
实验六十八　Western杂交 171

参考文献 173