实验前该准备哪些试剂？怎么配制实验试剂？实验前该准备哪些仪器？怎么培养海马神经元？怎么观察神经元的形态学？怎么鉴定神经元？怎么培养小鼠中脑多巴胺能神经元？怎么培养神经干细胞？怎么培养原代神经胶质细胞？怎么测定小胶质细胞趋化、迁移、吞噬功能？怎么测试实验动物的学习和记忆？怎么检测基因芯片？怎么做神经免疫组织化学和免疫荧光染色？怎么应用Image J 神经生物分析软件、GraphPad Prism 6.0软件、SPSS软件？……本书图文结合予一一介绍。实验流程严格按照美国国立卫生研究院（NIH）、国立老化研究所（NIA）的标准、规范执行。内容实用，具有可操作性。 
      本书适合从事神经病学研究的人员，如神经内科、神经外科医师、研究生、医学院校基础研究人员，特别适合初学者阅读参考。

         实验流程严格按照美国国立卫生研究院（NIH）、国立老化研究所（NIA）的标准、规范执行,包括实验技术的概述，材料准备、操作步骤、操作指导、思考、注意事项（包括实验结果不是想要的时的应急预案）、失败的经验或成功的经验总结等,图文结合介绍Image J 神经生物分析软件、GraphPad Prism 6.0软件、SPSS软件的应用按本书的指导，可以提高实验效率，分析统计实验结果。

　　神经变性疾病（Neurodegenerative Diseases）是一类由于脑和（或）脊髓神经元结构和功能渐进性退变、缺失所导致的神经系统疾病，包括阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化等。随着全球社会人口老龄化进程加速，神经变性疾病患病人数逐年上升，已不再是少见病。神经变性疾病的早期诊断与识别困难，目前尚无有效的根治手段，加强其病因和发病机制研究成为国际神经科学领域的热点。除了年龄老化外，遗传和环境因素也是本类疾病的主要致病因素。神经变性疾病以运动功能和认知功能障碍为主要临床表现，组织病理学显示特定部位神经元缓慢渐进性丢失，并大多在神经细胞内出现蛋白质异常聚集、形成包涵体。此类疾病可能具有相似的发病机制，包括：蛋白的错误折叠；细胞器中蛋白降解紊乱，线粒体功能障碍，轴突转运异常；细胞程序性死亡（凋亡、自噬）；线粒体DNA突变和氧化应激等。
　　2013年我得到医院公派出国留学的机会，有幸来到世界著名的美国国立卫生研究院（NIH）、美国国家衰老研究所（NIA）进修学习。这里有二十几个研究机构，汇集了全世界的科学精英从事医学科学研究。之前我虽是个神经内科大夫，但始终无法忘却在攻读硕士、博士研究生期间从事神经科学实验过程所经历的痛楚和乐趣。原以为自己掌握了许多神经生物学的基本实验技能，但来到NIH之后才知道国内与这边的差距。NIH的神经科学家们做实验的规范程度和完成实验的效率让我惊叹不已！我认为这些很大一部分归功于规范的实验操作流程和有序的分工协作。有感而发，心中萌动编写一部规范、实用的神经变性疾病相关的实验技术操作和方法的手册。于是乎，尽我所能，尽力在NIH把标准规范的实验流程一一学到，每项亲自操作，并由此将所学实验经历和经验融汇记载于书中，一来作为督促自己学习的动力，二来将其中的经验与其他学者分享。但更为重要的是，本书的编写旨在帮助国内从事或感兴趣神经生物学领域的研究人员（尤其是初学者）在实验操作方面尽可能少走些弯路，提高一些实验效率，多一点时间去观察和发现真实的、新的实验现象，多一些时间去思考实验设计、训练自己的科研思维，并碰撞出更多、更富有创新意义的思想火花。
　　同时，本书编写包含了神经变性疾病临床数据登记体例和数据库建设要点，并介绍了本单位团队自主研发的神经心理认知测试系统及其应用，以及我们在临床和基础科研过程中十分常用的图像和数据处理软件，如Image J、GraphPad Prism、SPSS的应用范式、Endnote文献编辑等。相信，无论是从事神经病学的临床还是基础科研人员都能从本书中获得许多十分有用的帮助。
　　本书的编写过程得到福建医科大学附属协和医院陈晓春教授、黄品华教授提出的宝贵意见。同时由衷感谢美国国立卫生研究院（NIH）、美国国立老化研究院（NIA）蔡怀彬高级研究员及其所在实验室成员在我在NIH学习期间对我实验技术的悉心传授，以及感谢他们在编写本书过程中提供的宝贵意见。
　　本书由国家自然科学基金（项目号：81200991及81571257）、福建省高校新世纪人才支持计划（项目号：JA13131）、福建省卫生系统中青年骨干人才培养项目资助计划重点项目(项目号：2014-ZQN-ZD-11)、福建省自然科学基金（面上联合）（项目号：2015J01398）以及国家临床重点专科老年病科建设项目、福建省临床重点专科老年医学科建设项目联合资助出版。
　　潘晓东
　　福建医科大学附属协和医院神经内科
　　福建省老年医学研究所
　　福建省分子神经病学重点实验室
　　2016年6月22日于福州

       潘晓东，副主任医师，医学博士，硕士生导师。福建省医学会神经病学分会秘书及青年委员，第九届中国医师协会神经内科医师大会华南分会秘书。长期从事神经病学的临床、教学、科研工作。曾赴美国国立卫生研究院（NIH）/国立老化研究所（NIA）研修1年。专业特长：阿尔茨海默病、帕金森病等老年神经变性疾病的诊治，尤其对各种痴呆性疾病的鉴别诊断及治疗具有丰富的临床经验。近年承担多项国家层面及省级科研课题，发表SCI源及核心期刊论文10余篇，主编专著1部。曾获“福建青年科技奖”及“福建运盛青年科技奖”荣誉。

第一章　原代神经细胞培养和细胞功能测定　/ 1 
第一节　原代皮质和海马神经元培养 1 
第二节　新生小鼠中脑多巴胺能神经元培养 3 
一、单层皮质星形胶质细胞表面培养新生鼠中脑多巴胺能神经元 3 
二、单层星形胶质细胞表面培养新生鼠中脑多巴胺能神经元及形成 
　　神经突触 9 
三、本节实验中使用到的试剂和溶液 11 
四、注意事项 13 
五、常见问题及解决方案 13 
六、预期结果 13 
七、时间因素 14 
第三节　小鼠神经干细胞培养 14 
一、成年鼠神经干细胞培养 14 
二、新生鼠海马神经干细胞的培养 19 
三、胎鼠神经干细胞的培养 20 
第四节　原代神经胶质细胞培养 21 
一、星形胶质细胞的分离和培养 21 
二、新生鼠小胶质细胞的原代培养 23 
三、成年鼠小胶质细胞的分离和培养 25 
第五节　小胶质细胞功能实验 29 
一、趋化和迁移实验 29 
二、体外测定小胶质细胞吞噬功能（吞噬尼罗红微球/a突触核蛋白/Ab） 30 
第二章　模式动物行为学实验　/ 34 
第一节　Morris水迷宫 34 
第二节　Y-迷宫 36 
第三节　小鼠平衡功能实验 39 
第四节　抑郁模型的建立和评定 40 
一、抑郁症的模型制作 41 
二、抑郁动物的行为学评价 45 
第五节　嗅觉行为功能测定 47 
一、埋藏食物小球实验 48 
二、嗅觉迷宫 48 
第六节　大脑中动脉闭塞模型的建立和评定 49 
第七节　运动功能评定 52 
一、小鼠肢体力量测试实验——小鼠抓力测试 52 
二、小鼠耐力测试实验——跑台实验 53 
第八节　感觉（痛触觉）系统评估 54 
一、Von Frey Test 54 
二、智能热板仪 56 
三、甩尾实验 57 
第三章　神经病理学实验　/ 59 
第一节　脑组织的取材、保存和标本制作 59 
第二节　脊髓组织的取材、保存和标本制作 62 
一、脊髓的取材和保存 62 
二、 脊髓冰冻切片的制作 64 
第三节　小鼠脑脊液采集 66 
第四节　海马脑片场电位的神经电生理记录方法 67 
第五节　神经免疫组织化学和免疫荧光染色 71 
第六节　透视电镜标本制作 74 
第七节　老化组织相关病理特殊染色（SA-b-gal 、银染色） 77 
一、神经原纤维缠结（NFTs）染色 77 
二、b-淀粉样蛋白染色 80 
三、衰老相关b-半乳糖苷酶染色 82 
第八节　 神经组织高尔基染色 83 
第九节　神经组织体视学分析技术 86 
第十节　共聚焦扫描及定量技术 92 
一、激光共聚焦显微镜的成像原理 92 
二、激光共聚焦显微镜在神经变性疾病研究中的运用 93 
三、激光共聚焦显微镜结构 95 
四、基本扫描及图像获取 95 
五、微分干涉差（DIC）扫描及图像获取 102 
六、拼图扫描及图像获取 103 
七、Z-Stack扫描及图像获取 103 
八、时间序列扫描 105 
九、激光共聚焦图像定量及后处理 106 
第四章　神经生化和基因检测　/ 115 
第一节　转基因动物的基因型鉴定、保种和管理 115 
一、小鼠生殖生理 115 
二、小鼠的生长周期 116 
三、基因工程鼠饲养繁殖一般流程和注意事项 116 
四、常用小鼠品系的概况 117 
五、几种常用神经变性疾病转基因鼠的介绍和鉴定 118 
第二节　神经组织蛋白检测 125 
一、蛋白质印迹法 125 
二、免疫共沉淀原理及步骤 130 
三、动物脑组织匀浆检测Ab 132 
第三节　RNA提取及实时荧光定量PCR技术 134 
一、RNA提取 134 
二、RT-PCR 135 
三、qPCR 135 
第四节　基因芯片检测 140 
一、单核苷酸多态性芯片实验 140 
二、基因表达谱芯片检测 142 
第五节　荧光素酶报告基因技术分析启动子转录活性 143 
第六节　荧光定量PCR法检测端粒酶活性 146 
第七节　中枢神经系统突触和非突触线粒体的分离提取 148 
第五章　分子影像技术检测神经变性疾病　/ 157 
第一节　PET/SPECT-CT显像探针的制备 158 
第二节　fMRI成像技术的原理及其实验设计与数据处理 164 
一、fMRI实验设计 164 
二、实验设备 166 
三、实验数据处理 166 
四、fMRI实验相关的准备 169 
五、小结 170 
第六章　神经变性疾病患者临床神经评估、样本保存和数据库建设　/ 171 
第一节　神经变性疾病临床登记和数据库建立和实施 171 
一、临床研究目标的确立 171 
二、研究方案的确立 172 
三、组织机构的建立 173 
四、病例报告表（CRF）的建立 174 
第二节　神经变性疾病患者血液、脑脊液组织样本的保存和处理 177 
一、血液及血液成分的处理和保存 178 
二、脑脊液的处理和保存 179 
三、标本DNA的提取和保存 180 
　附表6-1　标本保存详细记录 180 
　附表6-2　关于使用组织样本开展科学研究的知情同意书 181 
第三节　 神经心理认知障碍测试诊断系统 182 
一、医生端系统 182 
二、用户管理 183 
三、临床病例登记 183 
四、案例管理 186 
五、统计打印 190 
六、量表管理 191 
第七章　神经生物学常用分析及作图软件的应用　/ 193 
第一节　Image J神经生物分析软件的应用 193 
一、 Image J神经生物分析软件的基本功能 193 
二、 Image J神经生物分析软件分析免疫荧光定量技术 197 
第二节　Graphpad Prism 6.0作图和统计应用 205 
一、折线图 205 
二、直条图 208 
三、生存曲线图 216 
四、散点图 219 
五、饼图 225 
第三节　Logistic回归、Cox风险模型以及Kaplan-Meier曲线的统计应用 231 
一、Logistic回归分析和ROC工作曲线的制订 231 
二、 Cox回归分析 238 
三、Kaplan-Meier曲线分析 242 
第四节　EndNote×7的应用 245 
一、文献管理 245 
二、论文撰写 245